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ROS活性氧檢測的具體方法及原理
更新時(shí)間:2019-12-26 點(diǎn)擊量:4249
       ROS活性氧檢測利用熒光探針DCFH-DA進(jìn)行活性氧的檢測。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細(xì)胞膜,進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后,可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜,從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF,檢測DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平。
  ROS活性氧檢測的具體方法:
  1、 抗體:事先咨詢,明確抗體種屬以及是否有該抗體可使用,如有一抗使用費(fèi)300元每指標(biāo),如無可由雙方協(xié)商而定,客戶自己購買提供或我公司代購;
  2、 標(biāo)本收集與保存:
  組織樣品  新鮮組織放入液氮或-70度保存,組織不少于100mg(約綠豆大?。?;
  培養(yǎng)細(xì)胞  通過細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2000000個(gè)細(xì)胞于EP管,加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑,混勻后保存于冰箱(-70℃,避免反復(fù)凍融);
  血液細(xì)胞標(biāo)本  以抗凝管保存血樣或以淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞后加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑,保存(-70℃可長期保存,避免反復(fù)凍融)
  血清或細(xì)胞培養(yǎng)液標(biāo)本  離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管,保存(以上4℃可保存15-20天,-70℃可長期保存,避免反復(fù)凍融)
  3 、 樣本運(yùn)輸:可選以下的一種方式寄送標(biāo)本
  組織樣本、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸或加入蛋白保護(hù)劑后加冰袋運(yùn)輸;
  細(xì)胞樣本也可以直接快件寄送培養(yǎng)瓶(密封不污染,培養(yǎng)液不漏出,細(xì)胞不要長得太滿,50%左右,灌滿培養(yǎng)液);
  血清或上清液直接加冰袋寄送(密封液體不漏出,視路途遠(yuǎn)近2-3天可到達(dá))。

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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