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考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)

微量法

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格: 100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體25mL×1 瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：500μg/mL×1 瓶，4℃保存，臨用前用蒸餾水稀釋為50μg/mL。

產(chǎn)品說(shuō)明：

樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外，可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。

在酸性溶液中，考馬斯亮藍(lán)G-250 與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍(lán)色復(fù)合物：該復(fù)合物在595nm處有最大吸 收峰。 其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質(zhì)分析。

自備儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取

1.   液體樣品：澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。

2.   組織樣品：按照組織質(zhì)量 (g) ：提取液體積(mL)為1：5~ 10 的比例 (建議稱(chēng)取約0. 1g組織，加入 1mL 提取液 (自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水) ) 。冰浴勻漿，    10000rpm ，4℃離心10min ，取上清，即待測(cè)液。  (動(dòng)物樣品常常需要稀釋)

3.   細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量 (104個(gè)) ：提取液體積 (mL) 為500~ 1000：1 的比例 (建議500 萬(wàn)細(xì) 胞加入1mL 提取液) ，冰浴超聲波破碎細(xì)胞 (功率300w ，超聲3 s ，間隔7s ，總時(shí)間3min ) ；然后 10000rpm ，4℃ ，離心10min ，取上清置于冰上待測(cè)。

二、吸光值測(cè)定

1.   分光光度計(jì)預(yù)熱30 min 以上，蒸餾水調(diào)零。

2.   空白管：取0.5 mL EP管，加入40μL 蒸餾水，250μL 試劑一，混勻后室溫靜置10min ，取200μL 于 微量玻璃比色皿/96孔板，595nm 比色，10~20min 完成比色，記為A 空白管。

3.   標(biāo)準(zhǔn)管：取0.5 mL EP管，加入40μL 標(biāo)準(zhǔn)液，250μL 試劑一，混勻后室溫靜置10min ，取200μL 于 微量玻璃比色皿/96孔板，595nm 比色，10~20min 完成比色，記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。

4.   測(cè)定管：取0.5 mL EP管，加入40μL 待測(cè)液，250μL 試劑一，混勻后室溫靜置10min ，取200μL 于 微量玻璃比色皿/96孔板，595nm 比色，10~20min 完成比色，記為A 測(cè)定管。

三、蛋白質(zhì)含量：

C 待測(cè) (μg/mL) =50×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)

C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)品蛋白質(zhì)濃度，50μg/mL。

注意事項(xiàng)：

1.   加考馬斯亮藍(lán)后，在10~20min 內(nèi)吸光值相對(duì)較穩(wěn)定，因此須在10~20min 完成比色。

2.   不宜用石英比色皿，可用玻璃或塑料比色皿，測(cè)完成后立即用95%乙醇沖洗。

3.   測(cè)定前用1~2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保蛋白濃度在0~ 100μg/ml 范圍內(nèi)，否則需要做相應(yīng)稀釋。

本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請(qǐng)勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測(cè)等用途！

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