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DH5α感受態(tài)細(xì)胞說明書

   DH5α Competent Cell

   目錄號：B0808

   保存條件：-80℃保存。

   組分說明

                      Cat. No.                         B0808B

                      Size                             10×100  μl

                      DH5α  Competent  Cell            10×100  μl

                      Control DNA pUC19，0.1    ng/μl      10 μl

   產(chǎn)品簡介

    本產(chǎn)品是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA

的熱擊轉(zhuǎn)化。DH5α是一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株，其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載

體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)α互補，可用于藍(lán)白斑篩選 recA1和endA1的突變

有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可

達(dá)108，適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途

注意事項

 1．感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在 -80℃下保存，不可反復(fù)凍融和放

    置時間過長，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

    2．轉(zhuǎn)化所有步驟均在無菌條件下操作。

    3．包裝中有0.1ng/μl的pUC19DNA，供對照試驗使用。

    操作步驟

 1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。

以下實驗以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

 2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量

    的DNA，通常100μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。

 3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘。

 4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。

 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。

 注意：1）涂布用量可根據(jù)具體實驗調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆數(shù)較少，可通過離心（4,000rpm，2分鐘）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于平板中。

   2）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

   3）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

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